PCR基因?qū)嶒?yàn)室設(shè)計(jì)
PCR基因?qū)嶒?yàn)室設(shè)計(jì)其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,例如:艾滋病檢測(cè)、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測(cè)和診斷,DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定及法醫(yī)物證,動(dòng)、植物檢疫,動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè),動(dòng)物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測(cè),轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。
一、PCR基因?qū)嶒?yàn)室必須擁有的條件:
1、必須在無(wú)菌無(wú)塵環(huán)境下進(jìn)行操作;
2、檢測(cè)人員必須通過(guò)國(guó)家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書;
3、必須通過(guò)國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證;
4、檢測(cè)設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求;
5、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實(shí)驗(yàn)室;
二、PCR基因?qū)嶒?yàn)室建立辦法流程:
1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū);
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道;
3、建立前PCR區(qū);
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作;
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物;
6、控制污染的方法;
7、后PCR區(qū)PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方;
PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制
各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾,防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾
實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好;所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)渡;墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應(yīng)滿足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。五、PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)
1、幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況,試劑準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對(duì)小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應(yīng)大一些。
2、試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。
3、PCR實(shí)驗(yàn)室沒有嚴(yán)格的凈化要求,可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。