PCR實驗室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進(jìn)行PCR實驗的必備場所。實驗室中不注意污染的話會影響檢驗結(jié)果。博泰小編帶大家了解PCR實驗室的污染源與措施有哪些。

一、PCR實驗的污染來源

1、樣本間交叉感染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)導(dǎo)致外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。 

2、實驗試劑污染：主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中PCR試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃，但這個過程也充滿污染風(fēng)險。

3、擴增產(chǎn)物污染：大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋，這是PCR反應(yīng)中最主要、最常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。

二、防止實驗污染都有哪些措施

1、正確佩戴手套：手套未緊密貼合拇指、食指和中指，在進(jìn)行開蓋操作時容易發(fā)生交叉污染。 

2、正確使用生物安全柜：簡單、整潔、避免通風(fēng)口堵塞；操作前后紫外線照射，消毒劑隨手可及；廢液缸里有1/3體積的含氯消毒液，并且及時清理廢液缸，保證廢物不超過廢液缸體積的2/3。  

3、核酸提取儀去污染：每天多批次檢測時，在每一批次檢測完以后必須用75%的乙醇和核酸去除劑對儀器進(jìn)行去污染。

4、重視通風(fēng)：不定期對房間進(jìn)行通風(fēng)，每次至少持續(xù)30min。

5、PCR擴增區(qū)去污染：PCR反應(yīng)管必須蓋緊，避免擴增后的核酸對環(huán)境的污染。

6、人員要求：進(jìn)入PCR實驗室，需要經(jīng)過從基礎(chǔ)理論、實驗原理、規(guī)范操作、質(zhì)量保證到注意事項等規(guī)范的培訓(xùn)，并獲取PCR上崗證。 

7、檢測風(fēng)險：檢測過程中，樣本的開蓋，核酸提取的震蕩、離心都有可能生氣溶膠，有感染的風(fēng)險。

8、防護(hù)要求：必須按照生物安全三級實驗室的個人防護(hù)要求進(jìn)入。

9、建設(shè)要求：PCR實驗室的建設(shè)需要設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)的“四區(qū)”：試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、PCR擴增檢測區(qū)和擴增產(chǎn)物檢測區(qū)。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染，并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。