PCR技術(shù)憑借特異性強、靈敏度高、對檢測樣品要求低、方便快捷等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于各種臨床診斷。目前國內(nèi)二級以上的醫(yī)院都在開展PCR技術(shù)的各種臨床應(yīng)用，PCR實驗室是承載PCR技術(shù)應(yīng)用的設(shè)施，實驗室的合理設(shè)計才能確保檢測結(jié)果的可靠性，博泰小編帶大家了解PCR實驗室功能與設(shè)備設(shè)計要點相關(guān)知識。

一、試劑儲備區(qū)

該區(qū)域主要完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲存、配制和封裝工作。所有運送到該區(qū)域的試劑和材料不應(yīng)經(jīng)過其他區(qū)域，試劑和原材料應(yīng)在本區(qū)內(nèi)儲存和制備。本區(qū)域的氣壓應(yīng)相對外界保持正壓。該區(qū)域的設(shè)備主要是冰箱、天平、混勻器、低速離心機(jī)、加樣器、可移動紫外燈等。由于該區(qū)域有多種試劑，所以“安全”應(yīng)是平面設(shè)計首要考慮因素，平面設(shè)計時應(yīng)保持通風(fēng)流暢、逃生暢通。首先，實驗臺布置在房間的兩側(cè)，中間的過道全部通向走廊便于疏散。同時根據(jù)國際人體工程學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)，實驗臺與實驗臺通道設(shè)計為1500mm，中間的通道可滿足兩邊坐人中間過人的要求。

二、標(biāo)本制備區(qū)

1、該區(qū)域的功能是樣本的保存、核酸提取和貯存、樣本加入擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。樣本應(yīng)直接運送至該區(qū)并儲存在本區(qū)內(nèi)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。對于氣流壓力的控制，由于在本區(qū)內(nèi)加樣操作可能產(chǎn)生氣溶膠，為避免氣溶膠擴(kuò)散出去對外界造成污染，本區(qū)應(yīng)對外界保持負(fù)壓;同時本區(qū)相對于擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

2、該區(qū)域的設(shè)備主要是生物安全柜、加樣器、臺式高速離心機(jī)、臺式低速離心機(jī)、水浴鍋、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。其中需要注意的是，生物安全柜最好選用B2型，這種生物安全柜所有的吸入氣流和垂直氣流都經(jīng)過高效過濾器過濾后排到室外，不再進(jìn)入生物安全柜循環(huán)或者返回該區(qū)域，這種生物安全柜可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間交叉“污染”，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

三、擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測定。此外，反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板(來自標(biāo)本制備區(qū))的加入等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。對于氣流壓力的控制，相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域的設(shè)備主要是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀、加樣器、超凈臺等。其中熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專用，并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動對擴(kuò)增測定的影響。

四、分析區(qū)

該區(qū)域的功能是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。該區(qū)域可能會用到某些可致基因突變的有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護(hù)。對于氣流壓力的控制，該區(qū)域是PCR實驗的最后一步，壓力應(yīng)為最低，相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。該區(qū)域的設(shè)備主要是加樣器、電泳儀(槽)、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等。

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