PCR實驗室除了試劑準(zhǔn)備間外，還要設(shè)計一些正負(fù)壓房間的緩沖間及壓差控制要求，博泰小編帶大家了解PCR實驗室緩沖間設(shè)計與壓差控制相關(guān)知識。

一、實驗室緩沖間的三種設(shè)計方式

1、緩沖間全部正壓，這種設(shè)計的理由是實驗室為負(fù)壓，緩沖間相對實驗室和走廊都為正壓可以有效阻隔室內(nèi)空氣往外流通，從而保證外界走廊不受實驗室的污染，從而達(dá)到緩沖間的阻隔作用。

2、緩沖間全部為負(fù)壓，這種設(shè)計理由是緩沖間相對實驗室和走廊都為為負(fù)壓，這樣實驗室內(nèi)如有污染物的情況下，緩沖間相對走廊為負(fù)壓，污染物也不會飄散到走廊里面，從而達(dá)到緩沖間的阻隔作用。

3、緩沖間相對實驗室為正壓，相對走廊為負(fù)壓，也就是說緩沖間壓力介于走廊和實驗室之間。這樣的好處是當(dāng)實驗室風(fēng)機運轉(zhuǎn)正常的時候，緩沖間相對實驗室為正壓，室內(nèi)空氣不會飄散到緩沖間，當(dāng)風(fēng)機停止運轉(zhuǎn)的時候，可能會存在部分氣體污染物附著門上或者通過門縫飄散到緩沖間。但當(dāng)風(fēng)機再次運轉(zhuǎn)的時候，緩沖間相對走廊為負(fù)壓，緩沖間的污染物不會飄散到走廊，另外緩沖間相對實驗室為正壓，即使緩沖間有一定的污染，在風(fēng)機再次開啟后，這些污染物也會再次飄散到實驗室里面。

以上分析都是理論上的可能，實際工作工程中配上滅菌燈和移動殺毒措施，可能很多現(xiàn)實不發(fā)生的。另外考慮到PCR實驗室各功能間面積不是很大，對于PCR實驗室的風(fēng)口設(shè)計，我的個人建議是，正壓房間送風(fēng)口靠近門側(cè)，排風(fēng)口靠里側(cè)設(shè)計；負(fù)壓房間送風(fēng)口靠里側(cè)，排風(fēng)口靠門側(cè)設(shè)計；但是考慮到生物安全柜的位置，標(biāo)本制備間的排風(fēng)口還是盡量靠里側(cè)，送風(fēng)口靠近門側(cè)，這樣便于放置生物安全柜，如果把排風(fēng)口設(shè)置到靠門口一側(cè)的話，生物安全柜可能就沒有合適放置位置了。

二、PCR實驗室壓差控制

1、實驗室為負(fù)壓：一般產(chǎn)生污染、有毒有害物質(zhì)的實驗室，均設(shè)計為負(fù)壓。如化學(xué)類實驗室、生物安全實驗室等，其目的是避免實驗過程中產(chǎn)生的污染物溢出對其他實驗室造成不利影響。

2、實驗室為正壓：一般潔凈實驗室、動物實驗室等，均設(shè)計為正壓，其目的是為了避免外部環(huán)境中可能存在的污染物進(jìn)人該實驗室,對實驗過程產(chǎn)生污染。

三、常見PCR實驗室壓差設(shè)計

PCR實驗室的各個實驗區(qū)域之間應(yīng)形成單向流程的屏障保護(hù)，環(huán)境壓力從試劑準(zhǔn)備區(qū)到產(chǎn)物分析區(qū)逐漸遞減。

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)是工藝流線的開始，設(shè)計為正壓或常壓，避免外界環(huán)境的污染。

2、樣品制備區(qū)一般為常壓或負(fù)壓，大多數(shù)情況下設(shè)計成二級生物安全實驗室，避免實驗產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。

3、核酸擴增區(qū)為負(fù)壓，避免實驗產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。

4、產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，通常壓力設(shè)計為最低，避免實驗產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。

四、PCR實驗室壓差設(shè)計優(yōu)化建議

上述PCR 實驗室的壓差設(shè)計原則上是正確的，但存在兩個比較明顯的缺陷：

1、緩沖間和專用走廊的功能重合，無法發(fā)揮“緩沖間+專用走廊”的最大作用。

2、上述壓差設(shè)計只能避免“實驗室產(chǎn)物不外溢”“外界環(huán)境不侵入”二者中的一項。在同時設(shè)有專用走廊和緩沖間的情況下，可以對壓差設(shè)計進(jìn)行優(yōu)化，以實現(xiàn)2項功能的兼顧。

五、帶緩沖間的PCR實驗室

1、在減少實驗室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。緩沖間通常設(shè)置在專用走廊與實驗區(qū)之間,起到隔離作用，減少實驗室內(nèi)外的空氣交換，防止在物流傳遞過程中產(chǎn)生交叉污染，同時起到控制壓差、保證實驗區(qū)域潔凈度的作用。PCR實驗室污染擴散控制的關(guān)鍵在于隔離，而非氣流的擴散。

2、PCR實驗室中，存在兩類壓差控制：一類是4個實驗區(qū)之間的相互壓差；另一類是每個實驗區(qū)、緩沖間、專用走廊間的相互壓差。前者用以實現(xiàn)單向的工藝流線，避免傳遞窗在2扇門不慎同時開啟時的氣流逆轉(zhuǎn);后者用以保證每個實驗區(qū)域氣流的獨立性，避免受到共用的專用走廊影響。

3、工作時每個實驗區(qū)的壓力均高于緩沖間。氣流擴散方向為4個實驗區(qū)域和專用走廊的空氣分別流向4個緩沖間。由于設(shè)置了緩沖間，既可防止每個實驗區(qū)受到專用走廊空氣中可能存在的污染，保證實驗產(chǎn)物的質(zhì)量，同時還可防止實驗過程中產(chǎn)生的污染物隨空氣流人專用走廊，對工作人員造成危害。

4、當(dāng)產(chǎn)物分析區(qū)不設(shè)緩沖間時，壓差設(shè)計邏輯同產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)有緩沖間時一致，試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、核酸擴增區(qū)、專用走廊的空氣分別流向緩沖間1、2、3，此外還有部分專用走廊的空氣流向產(chǎn)物分析區(qū)。本文所講的氣流方向是指非正常情況下的氣流擴散方向。實際上每個區(qū)域都有獨立進(jìn)風(fēng)和排風(fēng)設(shè)施，該實驗區(qū)域絕大多數(shù)的通風(fēng)量是通過進(jìn)排風(fēng)設(shè)施完成的。

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