PCR實(shí)驗(yàn)指的是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法，PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，癌基因的檢測(cè)和診斷，DNA指紋，個(gè)體識(shí)別，親子鑒定及法醫(yī)物證等。博泰小編今天就PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)、建設(shè)要求和要點(diǎn)帶大家進(jìn)行了解。

一、PCR實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)知識(shí)

就新冠病毒核酸檢測(cè)來(lái)說(shuō)，RT-PCR是目前使用最廣泛和較準(zhǔn)確的篩選和確認(rèn)方法。就是通過(guò)擴(kuò)增新冠病毒RNA，通過(guò)熒光探針實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，這種方法很靈敏，也能夠很好地定量。從目前來(lái)看，很多核酸檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確率都不錯(cuò)，而檢測(cè)反應(yīng)的準(zhǔn)確程度取決于公布的基因序列的準(zhǔn)確程度，以及PCR過(guò)程中引物、探針等的設(shè)計(jì)。當(dāng)然，也可用測(cè)序方法更準(zhǔn)確的檢測(cè)新型冠狀病毒，但是這對(duì)儀器要求高，速度也慢，不適合大批量篩查，所以說(shuō)主流的檢測(cè)方法仍是實(shí)時(shí)熒光定量法。那在新冠病毒肆虐后，必然會(huì)引起相關(guān)機(jī)構(gòu)單位著力建設(shè)規(guī)范的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室。

二、PCR實(shí)驗(yàn)室布局

PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)，樣品制備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域，并設(shè)有專(zhuān)用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密連接，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)，即從：試劑準(zhǔn)備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴(kuò)增室——產(chǎn)物分析室，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)該安裝紫外燈，紫外燈波長(zhǎng)為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。

三、實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1. 試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備，分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平，冰箱，離心機(jī)，加樣器，振蕩器等。對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求，一般為+10Pa。

2. 樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存，核酸提取，貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，生物安全柜，離心機(jī)，加樣器，振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员苊鈴泥徑鼌^(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染，一般為+10Pa。

3. 擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板（來(lái)自樣品制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來(lái)自試劑準(zhǔn)備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀，冰箱，離心機(jī)，加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。

4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀，洗板機(jī).加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，一般為-25Pa，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。

四、PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實(shí)驗(yàn)工藝流，物流，人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾，防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染。PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴(yán)格控制送，排風(fēng)的比例以保證個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

五、PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾

實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固，氣密性好；所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)度；墻體內(nèi)壁光潔，不積塵，耐腐蝕，易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹(shù)脂自流坪，材料應(yīng)滿(mǎn)足無(wú)縫隙，無(wú)滲漏，光潔，耐腐蝕的要求。

六、PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

1.試劑準(zhǔn)備區(qū)，樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。

2.幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對(duì)小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應(yīng)大一些。 

如有需要可直接撥打電話：13357726918（微信同號(hào)）